ELISA實驗出現異常的原因分析

ELISA實驗是我們大家最常見的實驗,也是比較容易出問題的實驗,可能你一不小心,你的整個實驗便是無功能重來那!所以小編給您講解在使用ELISA試劑盒做實驗的時候，有些細節若是做不好會出現實驗異常，或者效果不佳，那么你有想過是什么原因嗎？

一、白板異常：顯色步驟結束后，酶標板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。

1. 試劑已過效期，或不同試劑盒組分混用（解決方式：檢查試劑的組分及批號，確認未過期以及所有組分均屬對應的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用）。

2. 錯加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B（解決方式：嚴格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現象）。

3. 洗板及加樣過程中，酶標受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力（解決方式：確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗干凈）。

4. 終止液誤作洗滌液稀釋或當底物緩沖液配制（解決方式：每次配制時都應看清標簽標明物質）。5. 蒸餾水有問題（解決方式：確認配制洗液的純化水達到要求且未污染，與好蒸餾水比較）。·顯色弱、靈敏度低：實驗結束后，包括陽性對照、質控在內的所有板孔顏色均較淡。

二、陰陽性對照正常，但質控、參考品或個別弱陽性標本未能檢出。

1. 未達要求的孵育溫度及孵育時間可檢出強陽性標本，但質控或弱陽性標本受 溫度變化影響較大而被未檢出（解決方式：質控品或標本避免反復凍融。標本在一周內使用的，可存于 2-8℃，如需長期保存，應置于-20℃以下保存。質控品應小量分裝，并置于-20℃以下保存）。

2. 質控品或標本高溫放置過久，或被反復凍融致待測物滴度下降，而未能檢出（解決方式：重新設定酶標儀的參數，特別是檢查濾光片是否匹配）。

3. 儀器設定不正確，濾光片不匹配（解決方式：重新設定酶標儀的參數，特別是檢查濾光片是否匹配）。

三、實驗結束后，陰陽性對照正常，質控正常，但臨床標本感覺顯色較弱

1. 待測標本中可能不含強陽性標本，故結果可能是正常的（解決方式：如有懷疑，可復檢）。

2. 標本加入疊氮鈉作為防腐劑（解決方式：酶免實驗中的標本禁用疊氮鈉作為防腐劑，可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑）。